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  2. 操作規程

    Himac CP100NX超速離心機熱封管封口操作說明

            eppendorf Himac公司出品的STF3封管機(Tube Sealer)利用PA材料熱塑性特征,利用密封管帽將細長管口加熱到熱變形溫度以上質熔點溫度之間,使材料充分軟化并具有一定流動性,體積膨脹的材料在管帽和管內氣壓雙重壓力下,將管口斷面重塑形成圓帽而封閉管口。密封處理后的離心管可用于 Himac CP100NX、CP90NX、CP80NX和CS150NX系列超速離心機的固定角轉子、垂直轉子和近垂直轉頭離心。

            與Beckman Optima系列超速離心機采用的Cordless Tube Topper熱封器,STF3采用專用管架批量載入離心管,一次可處理多達8只熱封管。操作所需工作部件簡單,熱封時間和受熱部位可控性好,操作簡便,密封質量和效率更高。

    Himac CP100NX超速離心機STF3封管機封口操作示意圖.jpg 

    一、材料與工具

           熱封管

           熱封管配套管架

           STF3封管機(200-240V)或STF2

           重量配平天平(可讀性0.01g)

           移液器或注射器

     

    二、封管操作流程

    2.1 離心管樣品裝填

           熱封管由管身、管肩和管頸三部分組成。

           樣品裝填時,取注射器經管頸部深入管肩以下位置,將樣品注入離心管中,液面高度達到管肩-管頸交界處時停止加樣,以留足下一步樣品管配平移液所需容量空間,并確保熱封管頸部保留少量空氣。

           不連續密度梯度離心梯度介質分層加樣,應按先低密度層、后高密度層、最后是待分離樣品的順序進行液體的裝填。具體操作是用移液器吸取適量低密度介質溶在管底中心緩慢釋放,再吸取更高梯度濃度的介質層液體穿透前面低密度介質層、在管底鋪設。不同濃度梯度介質自身密度不同,而密度較低介質層被高密度介質層平緩均勻抬升,形成上低下高的密度分層。以此方法,完成全部所需梯度介質的鋪設,可有效防止移液過程中梯度介質層因湍流和對流干擾造成梯度密度層紊亂。

           連續密度梯度離心是通過將固定密度梯度介質層添加后通過長時間靜置、利用梯度介質層間液體對流來實現連續密度梯度分布,故其梯度介質加樣操作手法和要求相對簡單。 

    Himac CP100NX超速離心機熱封管樣品填充液面高度控制演示.jpg

    2.2 離心管配平

           離心管重量的配平,是指將擬安裝于離心機轉頭對稱位置的兩個離心管,通過精細調整管內樣品容量的辦法,使樣品管工作重量保持一致,以避免轉頭工作時兩側承受的作用力不平衡而造成損壞。通常用樣品電子天平稱重法。將離心管豎直固定于天平中,繼續往管內加樣,直至兩個離心管總重量的差值控制在0.3g以內(使用 CP-NX系列離心機時,將樣品管液面高度誤差調整到5mm以內即可達到平衡目的)為止。

           離心管密封前管內殘留空氣過多,容易因氣泡上浮移動干擾、破壞管內密度梯度條帶的成形,并可能因管壁局部缺少液體有效支撐而變形。因此,配平階段的操作除了要控制樣品管重量均衡,另一個重要功能是要調整和有效控制離心管內樣品液面的高度。當發現裝填樣品后的液面距離管肩、頸交界部存在高差時,應進一步填充樣品以驅除多余空氣。

    Himac CP100NX超速離心機STF3封管機操作演示圖.jpg 

    2.3 密封離心管

           樣品管配平結束后,應檢查以管頸內壁是否有液滴吸附??捎米⑸淦骰蛞埔汗芪吒奖诩岸嘤嘁后w?;蛴脽o絨紙巾擦去管頸內粘附的水珠,使之處于干燥狀態;

           將離心管裝入相應規格的管架中;

           將管架載入STF3封管機底座上的管架導軌上,移動管架位置,使第一支離心管的管頸移動到封管機加熱器正下方的位置;

           按下封管機操作手柄直到加熱器壓住離心管的頸部,在此狀態保持2 - 3秒種后,將手柄向下拉到底并保持,直至HEAT Lamp 熄滅為止。

           用指甲去除熱封部位的管材溢出物,并輕推管頸部,檢查樣品是否泄漏。

           正常情況下,單支離心管密封耗時約需 40 秒即可完成。

     

     

    主要參考文獻:

    Rotors, Tubes, Bottles And Caps Instruction Manual for Ultracentrifuge (S99920420)

    Rotors And Tubes Instruction Manual for Micro Ultracentrifuge (S99927635)

    Use Rotors and Tubes Instruction For Beckman Coulter Preparative Ultracentrifuges (LR-IM-24AK)

     

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